目的 探讨雌二醇(17β-estradiol, E2)的3号位和17号位引入活性基团制备的半抗原对抗体灵敏度的影响,选用灵敏度较高的抗体建立一种牛奶中E2胶体金侧流层析免疫分析方法(colloidalgold-basedlateral flow immunoassay, CG-LFA)。方法 从E2的3号位羟基和17号位羟基引入活性基团分别制备半抗原H1a和H2,偶联载体蛋白制备完全抗原,购买CCRG 81045经过动物免parasite‐mediated selection疫和细胞融合筛选,制备单克隆抗体(monoclonalantibodies,mAbs),采用间接竞争酶联免疫吸附实验(indirect competitive enzyme-linkedimmunosorbent assay, icELISA)对mAbs性能进行评估,筛选出灵敏度最高的mAb,最后采用静电吸附法将胶体金标记抗体为探针,构建牛奶中E2的CG-LFA。结果 制备了H1a-7B7、H1a-7B12、H1a-9C7、H1a-10E7、H2-2E2、H2-3C10、H2-4A10和H2-6D28种mAbs,经过icELISA评估,其半数抑制浓度(halfmaximalinhibitoryconcentration,IC50)分别为0.116、0.207、0.072、0www.selleck.cn/products/smoothened-agonist-sag-hcl.370、0.442、6.170、0.415和4.411 ng/mL,最终选取H1a-9C7,构建牛奶中E2的LFA,消线(cut-off)值为6.00ng/mL,与苯甲酸雌二醇和雌三醇的交叉反应率分别为101.31%和2.43%,在真实样本加标回收实验中,检测结果与液相色谱-串联质谱法(liquidchromatography-tandemmassspectrometry,LC-MS/MS)结果一致。结论 E2的3号位引入活性基团设计合成的半抗原所制备的E2抗体灵敏度,比17号位引入活性基团制备的抗体灵敏度高,并且建立的LFA准确度良好,为牛奶中E2快速检测提供了一定的技术手段。