疥螨病是一种顽固的、有传染性的人兽共患皮肤病,由疥螨(Sarcoptes scabiei)寄生于宿主皮肤表皮内而引起。疥螨的排泄分泌物会引起宿主表皮和真皮细胞发生病理反应,导致瘙痒、红肿、过敏性炎症等临床症状。翻译控制肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)是一种新发现的寄生虫排泄分泌蛋白,已有研究证明部分寄生虫该蛋白能参与宿主炎症反应,主要影响肥大细胞、嗜碱性粒细胞脱颗粒和组胺的释放。目前关于疥螨翻译控制肿瘤蛋白(SsTCTP)的功能未见相关研究报道,本研究分析了 SsTCTP在疥螨虫体不同发育阶段mRNA相对转录水平,探讨了原核表达的重组蛋白(rSsTCTP)对宿主皮肤血管通透性和KU812细胞脱颗粒的影响,研究结果可能为疥螨的感染机制及疥螨病的防治提供新思路。主要研究工作及结果如下:一、疥螨翻译控制肿瘤蛋白mRNA相对转录水平及重组蛋白对小鼠皮肤血管通透性的影响为了分析SsTCTP mRNA在虫体不同阶段的相对转录水平,并且获得重组蛋白进一步探究其对宿主皮肤血管通透性的影响,以疥螨cacute otitis mediaDNA为模板克隆获得SsTCTP基因编码序列,利用qRT-PCR方法对SsTCTP mRNA在幼螨、若螨和成螨阶段的相对转录水平进行分析,采用原核表达方法获得重组蛋白rSsTCTP。最后通过构建小鼠伊文思蓝血管渗透模型,探究重组蛋白对小鼠皮肤血管通透性的影响。结果显示,SsTCTP基因编码序列长度是522bp,mRNA在幼螨中的相对转录水平最高,若螨次之,在成螨中的相对转录水平最低。伊文思蓝试验结果显示,rSsTCTP刺激后的皮肤样品在表皮原位和在去离子甲酰胺染料提取并量化测定后,血管通透性都明显升高。总之,SsTCTP在疥螨各个发育阶段均有表达,但在幼螨阶段的表达量相对更高;rSsTCTP皮下刺激后,能升高小鼠皮肤血管通透性,增加血浆渗漏。二、重组疥螨翻译控制肿瘤蛋白(rSsTCTP)对KU812细胞脱颗粒的影响为了进一步探究SsTCTP对宿主肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒通路以及脱粒物质的影响,构建人源嗜碱性粒细胞白血病细胞系(KU812)脱颗粒模型,模拟肥大细胞和嗜碱性粒细胞的脱颗粒机制。首先通过β-氨基己糖苷酶(β-HEX)释放试验验证脱颗粒模型构建效果;其次通过WB方法检测脱颗粒通路上主要蛋白表达及磷酸化程度;最后通过ELISA方法分析重组蛋白刺激后组胺和Th2型细胞因子的释放特性。结果显示,rSsTCTP刺激后,β-HEX释放率增加,脱颗粒通路上Lyn、NF-κB及MAPK家族蛋白的磷酸化水平升高,说明rSsTCTP可以激活Lyn介导的脱颗粒通路,诱导KU812细胞脱颗粒反应增强。ELISA结果显示,在重组GW4869使用方法蛋白刺激后,组胺释放量明显增多,Th2型细胞因子中IL-4、IL-6和IL-13释放量有不同程度的增多。综上,rSsTCTP能激活KU812细胞中Lyn介导的脱颗粒通路,引起组胺及TGalunisertib配制h2型细胞因子IL-4、IL-6和IL-13释放量不同程度增多。