目的:研究过表达的谷氨酸转运体-1(glutamate transporter-1,GLT-1)对无镁细胞外液诱导的细胞癫痫模型中神经元的保护作用及其机制,为进一步揭示GLT-1可能作为治疗癫痫的一个重要靶点提供理论依据。方法:为探讨过表达的GLT-1对无镁细胞外液诱导的细胞癫痫模型中神经元的保护作用,本实验选用新生24h以内的健康SD乳鼠大脑皮层,进行星形胶质细胞(astrocyte,Ast)和神经元原代培养,免疫荧光法鉴定培养细胞的纯度;纯化后的Ast行慢病毒转染过表达GLT-1;ethanomedicinal plants转染后的Aselleck化学st与神经元共培养至第10天,换无镁细胞外液诱导建立共培养细胞癫痫模型。后续的实验分成正常对照组、无镁组、无镁+GLT-1过表达慢病毒组(LV-GLT-1)和无镁+空载体慢病毒组(Vector-GLT-1)。采用流式细胞仪技术检测神经元胞内钙离子的浓度([Ca~(2+)]_i)、活性氧(ROS)水平和神经元的凋亡率变化;微板法检测共培养体系培养上清中Glu的含量。为进一步探讨过表达的GLT-1对无镁细胞外液诱导的细胞癫痫模型中神经元的保护机制,按照上述四个分组处理后,采用RT-q PCR和Western Blot分别检测星形胶质细胞中GS、SN1、CX43和神经元中SNAT1的表达。结果:1.星形胶质细胞和神经元的纯度均为95%以上。2.在无镁细胞外液诱导的细胞癫痫模型中,星形胶质细胞中GLT-1的表达较对照组显著下降;神经元[Ca~(2+)]i、ROS水平、神经元的凋亡率和培养上清中Glu水平均较对照组显著升高,过表达GLT-1可明显逆转上述的变化。3.在无镁细胞外液诱导的细胞癫痫模型中,GS、SN1、SNAT1的m RNA和蛋白表达均较对照组显著降低,CX43的m RNA和蛋白表达均较对照组显著升高,过表达GLT-1可明显逆转上述的变化过程。结SCH772984 NMR论:1.星形胶质细胞GLT-1失调可能导致Glu介导的神经元损伤。2.过表达GLT-1可通过促进谷氨酸和谷氨酰胺循环及影响半通道的开放,促进星形胶质细胞对摄取Glu的代谢,继而缓解无镁细胞外液诱导的神经元损伤作用。