目的:通过对MG患者的粪便进行微生物代谢组学检测,探讨MG患者与健康人群肠道微生物结构组成的差别,探讨肠道菌群生物多样性在芪参地黄颗粒治疗前后的改变,探讨肠道菌群与MG的相关性。方法:收集来自于长春中医药大学附属医院的20名受试者的粪便样本,其中MG组10人,健康组10人。收集粪便标本,16S检测MG组与健康组人群肠道菌群进行微生物群落组成和多样性的差异分析。对MG组10名患者分别于入组时,治疗GSK126配制后3个月、6个月进行粪便样本的采集,比较不同治疗时间段后MG患者肠道菌群的差异。结果:1.α多样性:健康人群的微生物的物种多于MG患者的微生物物种,健康人群与MG患者在ace、shannon、simpson三个指数中差异明显,服用芪参地黄颗粒治疗后,各组在shannon指数中差异明显。2.β多样性:主坐标分析和NMDS分析结果均验证了芪参地黄颗粒治疗的有效性:随着治疗时间的延长,服药6个月后患者的肠道微生物群落比服药3个月后患者的肠道微生物群落更加趋近于健康人群。且组间差异大于组内差异。3.门水平上,F/B的比值明显降低,Proteobacteria(变形菌门)的丰度显著升高;科水平上:Enterobacteriaceae(肠杆菌科)有显著性差异;属水平:Escherichia(大肠菌属)显著升高。4.芪参地黄颗粒干预治疗后,各组间的微生物群落发生了变化。门水平:Verrucomicrobia(疣微菌门)的丰度显著升高,Proteobacteria(变形菌门)的丰度显著降低。在科水平上,Lachnospiraceae(毛螺菌科)、Ruminococcaceae(疣微菌科)、Bacteroidaceae(拟杆菌科)的丰度逐渐升高趋近于健康人群。在属水平上:Bacteroides(拟杆菌属)显著升高,且治疗6个月后,MG-C组与健康人群在属水平的肠道微生物群落相似。5.Biomarker:肠杆菌目(Enterobacteriales)、大肠杆菌属(Escherichia)和变形菌门(Proteobacteria)是MG组肠道内显著升高的菌群。而MG组肠道内显著降低的菌群组包括:梭状芽孢杆菌(Clostridia)、厚壁菌门(Firmicutes)和疣微菌科(Ruminococcaceae)。结论:1.MG患者中存在明显的肠道微生物相关代谢紊乱。芪参地黄颗粒能够改变MG患者肠道菌群的丰度和多样性。2.芪参地黄颗粒通过降低肠杆菌、变形菌的丰度,增加梭状芽孢杆菌,疣微菌,双歧杆菌的丰度来调节Ⅰ型、Ⅱ型MG患者的肠道菌群。实验部分 芪参地黄颗粒改善EAMG大鼠相关症状及其对肠道菌群的影响目的:探讨芪参地黄颗粒对EAMG模型大鼠肠道菌群的影响。方法:36只雌性Lewis大鼠按照随机数字表法分为对照组,模型组,芪参地黄颗粒低、中、高剂量组及阳性药组(醋酸泼尼松),每组各6只。采用注射含Rα97-116肽段抗原进行重症肌无力大鼠模型建立。模型建立成功后连续灌胃治疗30天。通过体重,Lennon评分,PCP Remediation前肢抓握力,AChR-Ab评估芪参地黄颗粒疗效。各组大鼠外周血Th1、Th2分泌相关细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4的含量用ELISA法检测。各组大鼠脾脏淋巴细胞悬液中CD4+T、CD8+T、Treg细胞、Th17分泌相关因子IL-17细胞数量采用流式细胞术检测,以评估EAMG模型大鼠Th1/Th2/Th17/Treg及CD4+T/CD8+T之间比例失衡状态,通过以16S扩增子测序为技术手段,进行微生物群落组成和多样性分析,探讨芪参地黄颗粒的干预作用。结果:1.EAMG模型大鼠建立稳定,经中药干预治疗后,与EAMG模型组比较,芪参地黄颗粒低、中、高剂量组在体重、Lennon评分,前肢抓握力,耐疲劳能力以及外周血清AChR-Ab等方面均有显著意义(P<0.05)。2.ELISA结果示:与对照组相比,EAMG模型大鼠外周血清中TNF-α、IFN-γ细胞因子分泌水平显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),经芪参地黄颗粒干预治疗后,与EAMG组相比较,芪参地黄颗粒各剂量组干预后Th2分泌的相关细胞因子水平显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。3.流式细胞术结果示:与对照组相比较,EAMG组大鼠脾脏组织淋巴细胞中Th17细胞分化的数量显著增多(P<0.001),经芪参地黄颗粒各剂量治疗后,与 EAMG组相比,Th17细胞的数量显著减少(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。与对照组相比,EAMG组大鼠脾脏组织单个核细胞中CD4+T/CD8+T 比值显著升高(P<0.001),经芪参地黄颗粒干预后,与EAMG组相比,CD4+T/CD8+T 比值显著降低(P<0.001)。4.16S结果显示:与EAMG组相比,在门水平上:selleckchem Gefitinib-based PROTAC 3芪参地黄颗粒高剂量拟杆菌门(B acteroidetes)丰度显著降低,放线菌门(Actinobacteria)丰度显著升高;芪参地黄颗粒中剂量组厚壁菌门/拟杆菌门(F/B)比值显著升高。与EAMG组相比,在科水平上:芪参地黄颗粒高剂量组毛螺菌属丰度升高最多;芪参地黄颗粒中剂量组乳酸杆菌丰度显著升高;芪参地黄颗粒低剂量组拟杆菌门丰度显著升高。与EAMG组相比,在属水平上:芪参地黄颗粒高剂量组普氏菌属、粪球菌属的丰度显著升高,而Turicibacter、乳酸菌数的丰度显著降低。芪参地黄颗粒中剂量组Akkermansia、乳酸菌的丰度显著升高。与EAMG组相比,给药组群落的丰富度、多样性和遗传多样性程度有所增加但差异不显著(P>0.05);在属水平上群落间差异显著并影响组间差异的标记为普氏菌属、瘤胃球菌属、粪球菌属和Turicibacter。5.SCFAs:与对照组相比,EAMG组大鼠粪便总短链脂肪酸含量明显降低。与EAMG模型组相比,芪参地黄颗粒可以显著增加粪便中总短链脂肪酸的含量,尤其以乙酸、丙酸、丁酸为主。结论:1.EAMG存在明显的肠道微生物相关代谢紊乱。芪参地黄颗粒可以增加大鼠体重,有效改善临床症状,降低AChR-Ab含量,具有治疗重症肌无力的作用。2.EAMG大鼠外周血清中Th1、Th17的相关细胞因子分泌显著增多,Th2、Treg的相关细胞因子分泌显著减少,说明EAMG模型大鼠Th1/Th2和Th17/Treg之间处于失衡的状态,芪参地黄颗粒可以改善Th1/Th2/Th17/Treg之间的失衡状态。3.芪参地黄颗粒通过降低瘤胃球菌属和链球菌属的丰度,增加梭状芽胞杆菌和乳杆菌属的丰度来调节EAMG模型大鼠的肠道菌群。4.芪参地黄颗粒通过富集SCFAs产生菌类群,产生大量的SCFAs起到抵抗MG的作用。