红霉素抑制PI3K/Akt通路增加Nrf2蛋白表达减轻烟草烟雾暴露下单核细胞炎性反应的效果研究

目的 研究红霉素通过抑制PI3K/Akt通路增加Nrf2蛋白表达从而减轻烟草烟雾暴露下单核细胞炎性反应的效果。方法 以人单核细胞株(U937)为研究对象,采用烟草烟雾提取物(CSE)制造细胞氧化应激模型,分为空白对照(NC)组、CSE组(CSE刺激细胞)、红霉素组(红霉素预孵育+CSE刺激细胞)、抑制剂组(PI3K通路抑制剂LY294002预孵育+CSE刺激细胞)等4组。根据转染Nrf2-siRNA干扰细胞中Nrf2蛋白的表达,分为siRNANC对照组、siRNANC+CSE组、NC+CSE+红霉素组、Nrf2-siRNA组、Nrf2-siRNA+CSE组、Nrf2-siRNA+CSE+红霉素组等6组。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组细胞中Akt mRNA、Nrf2mRNA的表达。采用Westernblotting检测各组细胞内Akt、pAkt、Nrf2、核因子(NF)-κBp65蛋白的水平。结果在CSE刺激下,白细胞介素(IL)-8水平明显升高,pAkt及NF-κ确认细节Bp65蛋白的表达水平上升,Nrf2蛋白及Nrf2mRNA的表达水平下降。经LY294002或红霉素预孵育后,IL-8水平较CSE组下降,pAkt及NF-κBpbiomarker screening65蛋白的表达水平下降,Nrf2蛋白及Nrf2mRNA的表达水平有所升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组Akt mRNA水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。此外,Nrf2-siRNA组Nrf2的表达水平较siRNANC组明显降低,且siRNA组Nrf2的表达水平经CSE刺激及红霉素干预后无明显变化;而siRNANC组经CSE刺激后Nrf2表达水平下降,经红霉素干预后表达水平上升。siRNANC组及Nrf2-LY294002作用siRNA组经CSE刺激后NF-κBp65及pAkt表达水平上升,经红霉素干预后表达水平下降。Nrf2-siRNA组与siRNANC组的NF-κBp65及pAkt表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。6组间Akt蛋白的表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 红霉素可通过抑制PI3K/Akt通路增加Nrf2蛋白的表达减轻烟草烟雾暴露下单核细胞的炎性反应。