氟喹诺酮(Fluoroquinolones,FQs),是一类以4-喹诺酮为基本结构人工合成的第3代喹诺酮类药物。FQs通过与细菌的拓扑异构酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ结合,抑制细菌DNA的合成,从而对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌产生抑菌作用。FQs具有抗菌谱广、抗菌活性强、价格低廉且机体吸收快等特点,被广泛用于预防和治疗畜禽和水产养殖业中由细菌、衣原体和支原体感染所引起的各类疾病。近年来,因养殖户不严格执行休药期和滥用FQs导致食品安全问题日益严重。而且,在养殖过程中,部分养殖户为了追求治疗效果和养殖效益会混合添加多种FQs,导致动物源性食品中出现多种FQs残留的问题。由于该类药物会对人体产生诸多不良反应,我国监管部门逐渐加强了动物源性食品中FQs残留的检测和监管力度。目前针对FQs的免疫学检测方法较少,因此建立快速、高效灵敏且能广谱识别FQs的方法是非常必要的,而制备高灵敏度且能广谱识别FQs的单克隆抗体(Monoclonal antibody,购买AG-221m Ab)是建立免疫学多重检测方法的重要因素。洛美沙星(Lomefloxacin,LOM)基本结构与多数FQs类似,将其作为原料药合成免疫原对小鼠进行免疫,有望获得能广谱识别FQs的m Ab。本研究制备了抗多种FQs的m Abs,建立了量子点微球(Quantum dot beads,QBs)免疫层析方法(Lateral flow immunoassay,LFIA),用于黄鱼、鲈鱼和乌鱼中4种禁用FQs的检测。主要研究方法和结论如下:(1)通过碳二亚胺法,以LOM为半抗原,与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)与卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)偶联合成LOM-BSA和LLaboratory Fume HoodsOM-OVA,用LOM-BSA免疫小鼠,通过ic-ELISA(Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay)评价小鼠血清。选择抑制率高和阳性值高的小鼠进行细胞融合,融合后的杂交瘤细胞经三次亚克隆和筛选后共获得了5株细胞株。将制备得到的细胞株注射入小鼠腹腔内,通过其在小鼠腹腔内的腹水瘤诱生腹水,采用正辛酸-饱和硫酸铵法将得到的腹水纯化,共获得5种抗多种FQs的m Abs,分别命名为L2D7、L2E7、L4C9、L1H10和L5B6。通过ic-ELISA对5种m Abs的灵敏度和特异性进行了评价,5种m Abs对LOM的半数抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为0.215、0.206、0.308、0.201和0.408 ng m L~(-1)。其中,L2D7抗体与诺氟沙星(Norfloxacin,NOR)、培氟沙星(Pefloxacin,PEF)、氧氟沙星(Ofloxacin,OFL)、PI3K/Akt/mTOR抑制剂恩诺沙星(Enrofloxacin,ENR)环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)、达氟沙星(Danofloxacin,DAF)、氟罗沙星(Fleroxacin,FLE)、奥比沙星(Orbifloxacin,ORB)和吉米沙星(Gemifloxacin,GEM)有交叉反应。(2)建立了一种快速定量检测水产品中4种禁用FQs(LOM、PEF、NOR和OFL)的QBs-LFIA,优化了QBs-LFIA的各项参数,m Ab偶联最佳p H为6.0,m Ab最佳用量为6.0μg,EDC最佳用量为40μg,T线上LOM-BSA最佳浓度为0.4 mg m L~(-1),C线上羊抗鼠抗体最佳浓度为0.8 mg m L~(-1),探针最佳添加量为1.5μL。另外,本文探究了5种样品提取液和4种不同乙酸含量样品提取液的提取效率,最终选取0.5%-乙酸-84%乙腈水作为样品提取液。在最优条件下,QBs-LFIA检测黄鱼中LOM、NOR、PEF和OFL的IC_(50)分别为0.361、0.902、0.901和0.971μg kg~(-1),在鲈鱼中检测4种禁用FQs的IC_(50)分别为0.515、0.312、0.417和1.063μg kg~(-1),在乌鱼中检测4种禁用FQs的IC_(50)分别为0.761、0.505、1.011和0.872μg kg~(-1)。通过加速保存实验验证了本方法的稳定性,结果表明QBs-LFIA较稳定且具有较长的商品货架期。通过加标回收实验分析本方法的准确性,在黄鱼、鲈鱼和乌鱼样本中的加标回收率为74%-138%,变异系数为1.72%-16.48%。综上所述,本研究基于抗LOM的m Ab开发了一种QBs-LFIA用于黄鱼、鲈鱼和乌鱼中LOM、NOR、PEF和OFL的快速定量检测。本方法节约了检测时间,降低了检测成本,对水产品中FQs残留的筛查和监测提供了一种新的检测手段。