单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes),简称单增李斯特菌,是临床上常见的引发李斯特菌病的病原体。李斯特菌病病死率约为20-30%,受感染的动物大多表现为侵袭性疾病,包括脑炎、脑膜炎、败血症和流产。单增李斯特菌能够在多种环境中生存,污染农场环境和饲料,导致动物发生李斯特病,给人类和畜牧养殖造成严重损失。单增李斯特菌侵入宿主细胞的过程中会产生多种不同的毒力因子,协助菌体突破宿主的三层屏障(胃肠道、胎盘和血脑屏障)。作为单增李斯特菌的主要毒力因子,李斯特菌溶血素(listeriolysin O;LLO)对于细菌在细胞内的生命周期、屏障穿透、定殖和全身传播中有着不可或缺的重要作用,Ferroptosis抑制剂LLO的结构完整性和活性决定了单增李斯特菌的致病力。因此,LLO是抗单增李斯特菌感染的潜在重要靶标。近年来,天然化合物及其提取物以其独特的优势,包括来源多样性,分布广泛,低毒、低残留且无明显耐药性等,在抗细菌毒力因子方面的研究备受关注。基于此,本研究通过实验室建立的LLO抑制剂筛选平台,对多种中药提取物进行筛选,发现桂枝提取物在32μg/m L浓度下能够抑制LLO蛋白和单增李斯特菌培养物上清的溶血活性。故以肉桂醛为指标,对桂枝提取物的提取工艺进行优化,确定最佳提取工艺为:以桂枝药材投料量的20倍量加入80%体积分数的乙醇水溶液进行提取,提取2次,每次2 h,合并两次滤液,加入6倍量纯净水后于4℃静置12 h,过滤得到滤渣,烘干得到桂枝提取物粉末,建立桂枝提取物中肉桂醛的高效液相含量测定方法,并对该方法的适用性和准确性进行考察,最终确定所制备的桂枝提取物主要成分肉桂醛的含量为0.76%。通过荧光定量PCR试验、Western blot检测对桂枝提取物抑制LLO溶血活性进行初步机制分析,结果表明,所制备的桂枝提取物能够影响单增李斯特菌中溶血素基因hly的表达,降低细菌培养物的上清液中LLO蛋白的含量,同时,桂枝提取物可以抑制LLO蛋白的寡聚化,显著削弱LLO的成孔活性。细胞感染实验中,在使用桂枝提取物处理后,LLO介导的巨噬细胞损伤得到了明显的缓解,并且显著抑制了细胞内单增李斯特菌的增殖。本研究根据桂枝提取物有效成分的理化性质和体内吸收差的特点,开展桂枝注射液的制备工艺研究,最终确定桂枝注射液的处方为:桂枝提取物为主成分,N-N二甲基Intradural Extramedullary乙酰胺为有机溶剂,蓖麻油为注射用油,吐温-80为有机助溶剂,苯甲醇为止痛剂,叔丁基对羟基茴香醚为抗氧化剂,成功制备了桂枝提取物注射液。通过影响因素试验发现光照条件对桂枝注射液的含量存在一定的影响,故制剂在制备、存储、运输过程中,需要注意避光。加速试验考察了桂枝注射液留样稳定性,结果表明桂枝注射液各项质控指标均符合要求,具有良好的稳定性。通过人工建立单增李斯特菌小鼠感染模型,采用桂枝注射液进行感染小鼠的治疗学试验,发现桂枝注射液能够降低细菌感染小鼠的死亡率,降低单增李斯特菌感染肝脏、肾脏的细菌负荷,对单增李斯特菌感染的小selleck激酶抑制剂鼠治疗效果显著。综上所述,本研究通过前期筛选及机制确证,最终成功制备了桂枝注射液,所制备的桂枝注射液具有良好的质量可控性,对单增李斯特菌感染的小鼠具有良好的治疗效果,为兽医临床上单增李斯特菌的感染治疗提供一种新的有效中药制剂。