目的:基于EGFR激酶正构域和变构域的特征,设计和合成一系列新型氨基嘧啶衍生物作为EGFR双位点抑制剂,并确证其结构,初步评价其抗NSCLC活性和作用机制。方法:参考已有的EGFR双位点抑制剂的构效关系,应用拼合原理,将变构抑制剂EAI001和JBJ-04-125-02的药效团引入至氨基嘧啶结构中,设计得到新型氨基嘧啶衍生物。以邻苯二甲醛、5-溴-2-溴甲基苯甲酸甲酯、4-溴-2-溴甲基苯甲酸甲酯、4-氨基-6-氯嘧啶、2-氨基-4-氯嘧啶和4-氯嘧啶盐酸盐等为起始原料,经环合、Suzuki偶联、水解、亲核取代和还原等反应制得目标化合物6a-c、6dd-ll和6m-r。应用HRMS、~1H NMR和~(13)C NMR法对目标化合物的结构进行表征。采用CTG和MTT法测定目标化合物的体外抗NSCLC活性。采用流式细胞术对化合物的体外抗NSCLC作用机制进行初步探究。结果:设计并合成了18个新型氨基嘧啶类EGFR双位点抑制剂。目标化合物的结构经HRMS、~1H NMR和~(13)C NMR进行了确证。生物活性评价结果表明,大多数化合物对Ba/F3-EGFR~(L858R/T790M/C797S)、Ba/F3-EGFR~(Del19/T790M/C797S)和NCI-H1975-EGFR~(L858R/T790M/C797S)细胞均表现出一定的抑制作用,IC_(50)达到了微摩尔水平。其中,(R)-N-(4-((2-氨基嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1-氧代异吲哚-2-基)-2-苯基乙酰胺(6r)对Ba/F3-EGFR~(L858R/T790M/C797S)和NSC 127716Ba/F3-EGFR~(Del19/T790M/C797S)细胞的抑制活性最为突出(IC_(50)分别为0.42μM和0.41μM),优于阳性对照药Osimertinib(IC_(50)分别为1.12μM和0.75μM)。另外,化合物6r对NCI-H1975-EGFR~(L858R/T790M/C797S)细胞具有较为突出的抑制活性(IC_(50)=0.82μM),优于Osimertinib(IC_Inflammation and immune dysfunction(50)=2.94μM)、JBJ-04-125-02(IC_(50)=3.66μM)及Osimertinib和JBJ-04-125-02联合给药(IC_(50)=1.25μM)。作用机制研究结果表明,化合物6r呈浓度依赖性促进NCI-H1975-EGFR~(L858R/T790M/C797S)细胞凋亡,但其对NCI-H1975-EGFR~(L858R/T790M/C797S)细胞的周期进程无明显阻滞作用。结论:本文采用拼合原理设计了18个新型氨基嘧啶类EGFR双位点抑制剂,并完成了其化学合成、结构确证及生物活性评价,初步总结了该系列化合物的构效关系。体外抗NSCLC活性研究表明,大部分化合物对Ba/F3-EGFR~(L858R/T790M/C797S)、Ba/F3-EGFR~(Del19/T790M/C797S)和NCI-H1975-EGFR~(L858R/T790M/C797S)细胞表现出一定的抑制活性。其中,活性最佳的化合物6r对Ba/F3-EGFR~(L858R/T790M/C797S)和Ba/F3-EGFR~(Del19/T790M/C797S)细胞的抑制作用皆强于阳性对照药Osimertinib。该化合物对NCI-H1975-EGFR~(L858R/T790M/C797S)细胞的抑制活性优于Osimertinib、JBJ-04-125-02及Osimertinib和JBJ-04-125-02联合给药。此外寻找更多,明确了单一异构体与混旋体的活性差别,即R构型的异构体活性优于混旋体。另外,化合物6r对NCI-H1975-EGFR~(L858R/T790M/C797S)细胞具有一定的浓度依赖性促凋亡诱导作用。