弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse Large B-cell Lymphoma,DLBCL),一种非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)亚型,是一类高异质性与高侵染性的血液系统恶行肿瘤疾病。针对DLBCL,目前主要的治疗方式为一线药物联合治疗RCHOP法(Rituximab,CyclophosMedial collateral ligamentphamide,Doxorubicin,Vincristine,and Prednisone),但部分患者依R-CHOP法难以治愈。因此针对DLBCL患者新型药物的开发为该领域的研究热点。4-羟基水杨酰苯胺(Natural 4-hydroxysalicylINCB018424分子式anilide,HDS)为一种天然化合物,是一类核糖核苷酸还原酶(Ribonucleotide reductase,RR)的抑制剂,常用于肝胆疾病的治疗。前期数据表明,4-羟基水杨酰苯胺可用于制备淋巴瘤和多发性骨髓瘤的药物。其优势在于:在体外,该化合物能有效抑制淋巴瘤和多发性骨髓瘤细胞生长;在体内,该化合物能有效抑制小鼠淋巴瘤和多发性骨髓瘤生长,可发展为淋巴瘤和多发性骨髓瘤的治疗或预防药物。但该化合物在DLBCL疾病的效果仍然未知。我们在体外采用DLBCL细胞系OCI-LY1、OCI-LY8、NU-DUL-1、U2932与TMD8模拟DLBCL疾病模型,常用DLBCL药物阿霉素为对照和联合药物,分析HDS(不同浓度和不同作用时间)对DLBCL肿瘤的抑制效果及其作用机制。首先我们采用CCK-8法和琼脂糖凝胶克隆形成实验分析HCP-690550价格DS对DLBCL细胞增殖的影响。然后分析药物作用过程中,DLBCL的细胞状态变化,如γ-H2AX染色分析DNA损伤、Annexin-V/PI(碘化丙啶)染色流式分析细胞凋亡和PI染色流式分析细胞周期阻滞等。同时分析HDS与阿霉素联合用药是否可以更有效的杀伤DLBCL肿瘤。并通过Western Blot实验分析HDS杀伤肿瘤的作用机制。其次,我们将DLBCL细胞移植到小鼠皮下,观察DLBCL肿瘤在小鼠体内的增殖。实验组中,给小鼠用药:HDS或HDS/阿霉素联合。在移植后13天内,观察小鼠存活,体重变化、肿瘤体积变化。13天后,取出小鼠肿瘤组织,以及心脏、肝脏和肾脏组织,并做HE染色,分析肿瘤组织与其它脏器组织结构的变化,分析药物对肿瘤组织的杀伤以及药物对小鼠的毒性作用。最后,取肿瘤组织包埋切片,做免疫组织染色,分析HDS或HDS/阿霉素联合在体内对DLBCL肿瘤细胞增殖、DNA损伤与凋亡等细胞状态的影响。结果显示,HDS可显著抑制DLBCL细胞(OCI-LY1、OCI-LY8、NU-DUL-1、U2932与TMD8细胞系)增殖,显著降低DLBCL细胞克隆形成率。且HDS与阿霉素联合用药可更有效的杀伤DLBCL肿瘤细胞。细胞周期检测实验发现,HDS主要通过诱导细胞G2/M期细胞周期阻滞,抑制细胞增殖。且会诱导细胞出现显著的凋亡和DNA损伤,从而进一步抑制DLBCL肿瘤细胞增殖。体内实验中,对肿瘤组织和小鼠脏体器官的HE染色结果也显示,HDS可抑制小鼠DLBCL肿瘤组织细胞的增殖,诱导肿瘤细胞的凋亡,从而增加肿瘤组织的坏死,但对小鼠其它器官,如心脏、肝脏等组织结构无明显影响。肿瘤组织免疫荧光染色数据也表明,相较于对照组,在HDS和HDS/阿霉素联合用药组中,体内肿瘤组织的细胞γ-H2AX表达比例增加,而Ki-67表达比例降低,进一步表明HDS抑制DLBCL肿瘤的效果。综上所述,我们证明:(1)在体内和体外,HDS均可诱导DLBCL肿瘤细胞凋亡与DNA损伤,引起细胞周期G2/M阻滞,抑制肿瘤细胞增殖;(2)与阿霉素联合使用可更加有效抑制DLBCL肿瘤,(3)HDS对小鼠无明显毒性。