一、研究目的P2Y12是一种ADP的特异性受体,在哺乳动物的多种细胞表面呈现泛表达分布,如血小板和巨噬细胞等。P2Y12拮抗剂是目前临床上用于动脉粥样硬化相关心血管病(ASCVD)患者的一线抗血小板药物。巨噬细胞是维持机体铁稳态的关键细胞,也是红细胞生成所需铁离子的主要供应者。我们之前的工作发现P2Y12对斑马鱼的原初造血过程具有保护作用,提示P2Y12可能也参与机体铁代谢过程。本研究旨在探究巨噬细胞P2Y12是否参与巨噬细胞铁代谢及其具体机制,明确P2Y12抑制剂的潜在作用,为抗血小板临床诊疗策略的优化提供科学依据。二、研究方法(一)P2Y12调控铁过载的巨噬细胞的铁代谢1.将8周龄P2Y12敲除斑马鱼及其同窝对照随机分为正常和高铁饲喂组,后者在人工海水中加入100 μM枸橼酸铁铵(FAC)的饲喂2周以构建铁过载模型。通过对斑马鱼血清铁含量、铁蛋白含量、转铁蛋白含量的检测和转铁蛋白饱和度的计算、对铁储存主要器官(肝、脾、肠)的普鲁士蓝染色和铁含量生化检测,评估P2Y12在系统性铁代谢中的作用。2.将3日龄P2Y12敲除斑马鱼及其同窝对照随机分为正常处理组和高铁处理组,分别含有或不含有100 μMFAC的培养水中处理48小时,构建铁过载模型。通过整体普鲁士蓝染色和碘化丙啶(PI)染色,明确P2Y12缺失对巨噬细胞铁负荷和铁过载引起的死亡的影响。3.提取小鼠原代腹腔巨噬细胞,用P2Y12特异性激动剂ADPβs(10 μM)和FAC(100μM)共处理24小时,或用靶向P2Y12的小干扰RNA(siRNA)预处理24小时后再用FAC(100 μM)处理24小时,构建铁过载巨噬细胞模型。通过荧光定量PCR和蛋白印迹实验评估P2Y12功能干预对巨噬细胞铁负荷、促炎因子合成的影响;通过CCK-8实验观测P2Y12功能干预对铁过载引起的巨噬细胞铁死亡的影响;通过检测活性氧物质的生成明确P2Y12功能干预对巨噬细胞氧化应激的影响。(二)P2Y12通过NF-κB/铁调素轴调控铁过载巨噬细胞铁代谢1.将3日龄P2Y12敲除体及其同窝对照随机分为正常处理组和高铁处理组,分别含有或不含有100 μM FAC的培养水中处理48小时,构建铁过载模型。通过对全组织进行转录组测序筛选出差异表达的铁代谢相关基因。2.将3日龄野生型斑马鱼分别用P2Y12激动剂ADPβs(10 μM)和抑制剂Ticagrelor(10 μg/mL)、Clopidogrel(2.5 μg/mL)、2-MeSAMP(10 μM)、MRS2395(8 μg/mL)处理48小时,通过荧光定量PCR筛选P2Y12影响的下游基因。3.提取小鼠原代腹腔巨噬细胞,用P2Y12特异性激动剂ADPβs(10 μM)和FAC(100 μM)共处理24小时,或用靶向P2Y12的siRNA预处理24小时后再用FAC(100μM)处理24小时,构建铁过载巨噬细胞模型。通过蛋白印迹实验检测候选基因表达和潜在调控通路中关键蛋白的磷酸化水平,揭示铁过载巨噬细胞中P2Y12调控铁负荷的可能分子机制;给予相应信号通路以抑制处理,阐明P2Y12的下游信号通路;进一步观察P2Y12的功能干预对铁过载的巨噬细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量的影响,深入探讨P2Y12调控铁调素表达的信号通路。(三)抑制P2Y12通过减轻巨噬细胞铁负荷缓解动脉粥样硬化1.将5日龄P2Y12/ApoEb双敲除斑马鱼及其同窝对照分别予高脂饲喂至8周龄,构建动脉粥样硬化模型。通过苏木素-伊红染色、Masson染色、免疫荧光和普鲁士蓝染色分别评估P2Y12缺失对动脉粥样斑块面积、纤维帽厚度、巨噬细胞浸润和铁含量的影响;借由检测血清铁、血清铁调素、肝脾组织铁、巨噬细胞铁含量的检测评估P2Y12缺失对动脉粥样硬化模型的巨噬细胞铁代谢的影响;基于背主动脉组织中还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、丙二醛(MDA)含量评估P2Y12缺失对动脉粥样斑块内脂质过氧化水平的影响;最后检测背主动脉组织中铁死亡标志基因表达,评估P2Y12缺失对动脉粥样斑块内铁死亡水平的影响。2.提取小鼠原代腹腔巨噬细胞,用P2Y12特异性激动剂ADPβs(10μM)和50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共处理24小时,或用靶向P2Y12的siRNA预处理24小时后再用ox-LDL(50mg/L)处理24小时,诱导巨噬细胞来源的泡沫细胞。通过荧光定量PCR和蛋白印迹实验,评估P2Y12功能干预对巨噬细胞来源的泡沫细胞的铁负荷、促炎因子合成的影响;结合CCK-8实验和活性氧物质、脂质过氧化物的检测,评估P2Y12功能干预对ox-LDL诱导的巨噬细胞来源泡沫细胞铁死亡的影响;通过脂质检测和油红O染色,评估P2Y12功能干预对巨噬细胞来源泡沫细胞的脂质吞噬能力的影响;通过免疫印迹实验观察NF-κB磷酸化和铁调素的表达情况,评估P2Y12功能干预对巨噬细胞来源泡沫细胞NF-κB/铁调素轴的影响。三、实验结果(一)P2Y12调控铁过载的巨噬细胞的铁代谢1.P2Y12缺失可以促进铁过载的斑马鱼的铁动员1)通过高铁饲喂诱导继发性铁过载时,与同窝对照相比,P2Y12敲除体的血清铁水平明显升高(358.3333±80.1643 vs 681.5000±78.5300,P=0.0164)、转铁蛋白饱和度明显升高(57.6977±3.3245 vs 76.9741±3.4707,P=0.0006),而血清铁蛋白含量明显降低(1402.4451±1.2856 vs 1397.2374±1.1353,P=0.0061);2)与同窝对照相比,铁过载的P2Y12敲除体的肝组织中铁含量明显减少(0.3033±0.0523 vs 0.1543±0.0230,P=0.0214)、脾脏巨噬细胞内含铁血黄素和铁离子数量明显减少。2.P2Y12缺失可以减轻斑马鱼的巨噬细胞的铁过载1)高铁处理时,与同窝对照相比,P2Y12敲除体的巨噬细胞的铁含量明显减少;与同窝对照相比,P2Y12敲除体中铁负荷的巨噬细胞数明显减少(248.8333±17.4593 vs 103.8333±24.3809,P=0.0007)、平均铁负荷量明显减少(69.6667±7.3288 vs 44.5000±6.3338,P=0.0266);2)高铁处理时,与同窝对照相比,P2Y12敲除体中PI阳性的巨噬细胞比例明显降低(40.6170±3.1245 vs 22.0260±4.2060,P=0.0053)。3.敲降P2Y12可以减轻小鼠原代巨噬细胞的铁过载1)在FAC处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞铁蛋白重链表达量明显减少(18.0738±1.0323 vs 14.7800 ±0.6694,P=0.0281)、铁蛋白轻链表达量明显减少(22.8992±1.7432 vs 13.4111±1.1997,P=0.0302);2)在FAC处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞细胞活力升高(33.0278±0.5371 vs 47.7909±5.1666,P=0.0004)、铁死亡标志蛋白SLC7A11表达量增加(0.3198±0.0254 vs 0.5410±0.0570,P=0.0076)、GPX4 表达量增加(0.1999±0.0578vs0.6180±0.0701,P=0.0200);3)在FAC处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞内ROS相对含量明显降低(13.7551±1.2842 vs 6.9438 ±1.3154,P=0.0014);4)在FAC处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞内促炎因子IL-6的mRNA转录水平降低(1.6594±0.1092 vs 1.0153±0.1253,P=0.0031)、蛋白表达受到抑制(1.4184±0.0642 vs 0.7048±0.0592,P<0.0001);MCP-1 的 mRNA 转录水平降低(3.2369±0.4391 vs 1.9591±0.1121,P=0.0416)、蛋白表达受到抑制(1.5719±0.0628 vs 0.9060±0.0865,P=0.0008);TNFα 的 mRNA 转录水平降低(2.0686 ±0.1481 vs 1.5356±0.1353,P=0.0241)、蛋白表达受到抑制(1.5478±0.0842 vs 0.1781±0.0295,P=0.0001)。4.激活P2Y12可以加重小鼠原代巨噬细胞的铁过载1)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞铁蛋白轻链表达量明显升高(11.2266±0.5072 vs 13.9117±0.7410,P=0.0173);2)与FAC处理24小时组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞的细胞活力明显下降(65.8265±5.9913 vs 33.1276±3.0082,P=0.0028);与FAC+ADPβs共处理组相比,铁死亡抑制剂Fer-1+FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞的细胞活力明显升高(33.1276±3.0082 vs 53.8066±6.6244,P=0.0295);3)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞的铁死亡标志蛋白SLC7A11 表达量进一步下降(7.6437±1.5357 vs 1.0000±0.1941,P=0.0119)、GPX4 表达量进一步下降(1.6968±0.2914 vs 0.6647±0.3135,P=0.0424);4)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞内ROS相对含量明显升高(4.1149±1.3323 vs 13.3265±1.5323,P=0.0002);5)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞内促炎因子IL-6的mRNA 转录水平进一步升高(1.9259±0.2650 vs 3.6683±0.5764,P=0.0206)、蛋白表达也明显增加(1.3495±0.0381 vs 1.7613±0.0776,P=0.0048);MCP-1 的 mRNA 转录水平进一步升高(2.9541±0.3908 vs 4.6853±0.4811,P=0.0190)、蛋白表达也明显增加(1.2312±0.0791 vs 1.4756±0.0649,P=0.0439);TNFα 的 mRNA 转录水平进一步升高(2.2396±0.2124vs3.6192±0.4500,P=0.0197)、蛋白表达也明显增加(1.2594±0.0853 vs 1.5277±0.0786,P=0.0495)。(二)P2Y12通过NF-κB/铁调素轴调控巨噬细胞的铁代谢1.P2Y12调控铁过载的巨噬细胞的铁调素表达1)与同窝对照相比,铁过载的P2Y12敲除体组织内与铁代谢相关的基因有4 个表达上调 2 倍以上(cyp2r1、cyp2x8、sd:dkey-286h2.3、cyp8b3)、8个表达下调 2 倍以上(cyp2k6、cyp1b1、hmox1a、cyp1c1、cygb1、egln3、plod2、hamp);2)与空白处理组斑马鱼相比,ADPβs处理组hamp转录水平明显上调;Ticagrelor 处理组、Clopidogrel 处理组、2-MeSAMP 处理组、MRS2395处理组hamp转录水平均明显下调。3)在FAC处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞铁调素表达量明显下降(1.0000±0.0417 vs 0.6237±0.0652,P=0.0052),同时铁通道蛋白FPN1表达量明显升高(1.6176±0.0579 vs 2.1449±0.1514,P=0.0114);4)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞铁调素表达量明显增加(1.0000±0.0662 vs 1.3189±0.0727,P=0.0363),同时 FPN1 表达量明显降低(1.4284±0.1149 vs 1.1493±0.0512,P=0.0407)。2.P2Y12通过NF-κB信号通路调控铁过载的巨噬细胞的铁调素表达1)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞NF-κB磷酸化水平明显升高(1.6024±0.0508 vs 2.0342±0.1188,P=0.0161);与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞NF-κB磷酸化水平明显降低(1.6378±0.0603 vs 1.0000±0.1059,P=0.0006);2)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞STAT3磷酸化水平无明显变化(1.0000±0.1467 vs 0.9439±0.0245,P=0.9984);与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞STAT3磷酸化水平无明显变化(0.8669±0.0513 vs 0.selleckchem Pidnarulex9456±0.0935,P=0.9639);3)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞ERK磷酸化水平无明显变化(1.0000±0.060ABT-199 IC506 vs 0.6496±0.1187,P=0.3682);与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞ERK磷酸化水平明显降低(1.1520±0.1310 vs 0.6094±0.0551,P=0.0385);4)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞SMAD磷酸化水平明显降低(2.2618±0.2341 vs 1.0000±0.0591,P=0.0158);与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞NF-κB磷酸化水平明显降低(2.0874±0.2524 vs 0.6773±0.0790,P=0.0145);5)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞cAMP含量明显降低(36.6198±3.6628 vs21.0333±2.6230,P=0.0086);与转染对照 siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞cAMP含量明显升高(36.6198±3.6628 vs 70.6072±5.4204,P=0.0008)。3.P2Y12通过NF-κB/铁调素轴调控铁过载的巨噬细胞的铁代谢1)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞铁调素的转录水平明显升高(1.0000±0.0202 vs 1.5333±0.0648,P=0.0002)、蛋白表达明显增加(1.0000±0.1099vs1.7799+0.0568,P<0.0001);与 FAC+ADPβs共处理组相比,NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082+FAC+ADPβs共处理组铁调素的mRNA转录水平明显下降(1.5333±0.0648 vs 0.5507±0.0731,P<0.0001)、蛋白表达也明显减少(1.7799±0.0568 vs 1.4595±0.0871,P=0.0425);2)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞FPN1的表达量明显减少(1.0000+0.0559vs0.6380+0.0665,P=0.0034);与 FAC+ADPβs共处理组相比,NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082+FAC+ADPβs共处理组FPN1 的表达量明显增加(0.6380+0.0665 vs 0.9825±0.0691,P=0.0047);3)与FAC处理组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞铁死亡标志蛋白SLC7A11 的表达量明显下降(1.0000±0.1081 vs 0.4543±0.0454,P=0.0011)、GPX4 的表达量明显下降(1.0000±0.0559 vs 0.4688±0.0525,P<0.0001);与FAC+ADPβs共处理组相比,NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082+FAC+ADPβs共处理组SLC7A11的表达量明显升高(0.4543 ±0.0454vs0.7960±0.0833,P=0.0240)、GPX4 的表达量明显升高(0.4688±0.0525 vs 0.9282±0.0582,P=0.0002)。(三)抑制P2Y12通过减轻巨噬细胞铁负荷缓解动脉粥样硬化1.P2Y12缺失可以缓解斑马鱼的动脉粥样硬化进展1)高脂饲喂时,与同窝对照相比,P2Y12敲除体背主动脉粥样斑块面积明显减小(1.9471±0.4988 vs 0.4044±0.0293,P=0.0363)、纤维帽厚度明显增加(8.6000±1.2884vs 13.4000±1.4353,P=0.0376)、巨噬细胞浸润明显减少(21.5000±2.4597 vs 9.1667±1.6617,P=0.0020);2)高脂饲喂时,与同窝对照相比,P2Y12敲除体背主动脉粥样斑块中铁含量明显减少、GSSG 水平明显降低(3.0076±0.0189 vs 2.9428±0.0189,P=0.0359)、GSH 与 GSSG 比值升高(1.4124±0.0470vs 1.7252±0.0963,P=0.0154)、MDA 含量明显减少(6.8914±0.3741 vs 5.5059±0.4314,P=0.0274)。3)高脂饲喂时,与同窝对照相比,P2Y12敲除体背主动脉组织中铁死亡标志基因 slc7a11 表达明显升高(1.0000±0.0609 vs 1.4317±0.0801,P=0.0128)、gpx4a 表达明显升高(1.0050±0.0720 vs 1.9961±0.2828,P=0.0274)、hmox1a 表达明显降低(1.0114±0.1678 vs 0.6652±0.0627,P=0.0039)、ptgs2a 表达明显降低(1.0000±0.0578 vs 0.3121±0.0414,P=0.0006)。2.P2Y12缺失可以促进动脉粥样硬化的斑马鱼的铁动员1)高脂饲喂时,与同窝对照相比,P2Y12敲除体血清铁水平明显升高(0.2062±0.0256 vs 0.3809±0.0301,P=0.0016)、血清铁调素水平明显降低(1.3210±0.1021 vs 0.8184±0.1012,P=0.0058);2)高脂饲喂时,与同窝对照相比,P2Y12敲除体肝脏和肠道的组织铁含量明显减少、肠道巨噬细胞的铁含量明显减少(29.9693±0.7002 vs 3.7957 ±0.3481,P<0.0001)。3.敲降P2Y12可以减轻巨噬细胞来源泡沫细胞的铁过载1)在ox-LDL处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞中铁蛋白重链的表达量明显降低(11.8052±0.2721 vs 9.1786±0.5387,P=0.0017)、铁蛋白轻链的表达量明显降低(4.9813±0.2837vs 3.6895±0.4712,P=0.0475);2)在ox-LDL处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞的细胞活力明显增加(42.9892±0.8032vs48.8454±1.1450,P=0.0138)、ROS 含量明显降低(25.0752±3.1208 vs 6.8891±1.2486,P=0.0006)、脂质过氧化物含量明显减少(13.7167±0.6526 vs 6.2307 ±0.6162,P<0.0001)、铁死亡标志蛋白COX2的表达量明显减少(1.5712±0.0967 vs0.9299±0.0268,P=0.0018)、HO-1 的表达量明显减少(2.4976±0.1954 vs 1.1955±0.1250,P=0.0004);3)在ox-LDL处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞内促炎因子IL-6的转录水平降低(4.1325±0.4454 vs 1.5674±0.3951,P=0.0126)、蛋白表达减少(1.5745±0.2268 vs 0.7003±0.0812,P=0.0166);MCP-1 的转录水平降低(4.0793±0.5689 vs 2.1562±0.0614,P=0.0283)、蛋白表达减少(1.9737±0.2099 vs 0.8880±0.1823,P=0.0027);TNFα 的转录水平降低(3.8213±0.2936 vs2.5632±0.2986,P=0.0398)、蛋白表达减少(2.2144±0.1629 vs 0.7404±0.1630,P=0.0002);4)在ox-LDL处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞内总胆固醇含量降低(4.0172±0.1400 vs 3.1353±0.2955,P=0.0224)、甘油三酯含量降低(3.3908±0.1847 vs 2.7927±0.1724,P=0.0395)、低密度脂蛋白胆固醇含量降低(4.2708±0.2628 vs 3.1363 ±0.1801,P=0.0052)、脂质吞噬减少(10.7060±0.8986vs7.4474+0.6819,P=0.0011);4.激活P2Y12可以加重巨噬细胞来源泡沫细胞的铁过载1)与ox-LDL处理24小时组相比,ox-LDL+ADPβs共处理组巨噬细胞中铁蛋白重链的表达量明显增加(1.6227±0.2135 vs 3.9608±0.7702,P=0.0156)、铁蛋白轻链的表达量明显增加(1.2408±0.0929 vs 2.0680 ±0.1636,P=0.0079);2)在ox-LDL处理24小时的同时,与对照组相比,ox-LDL+ADPβs共处理组巨噬细胞的细胞活力明显降低(54.7106±2.7319vs27.3515±1.2765,P=0.0008)、ROS 含量明显增加(11.1197±1.0974 vs 25.0752±3.1208,P=0.0029)、脂质过氧化物含量明显增加(8.6696±1.0842 vs 13.7167 ±0.6526,P=0.0040)、铁死亡标志蛋白COX2的表达量明显增加(2.1123±0.2749 vs 3.4222±0.2609,P=0.0365)、HO-1 的表达量明显增加(5.2279±0.5889 vs 13.5478±1.9892,P=0.0038);3)与ox-LDL处理24小时组相比,ox-LDL+ADPβs共处理组巨噬细胞内促炎因子 IL-6 的转录水平升高(11.3204±2.3353 vs 19.3900±0.5775,P=0.0285)、蛋白表达增加(1.4869±0.1181 vs 2.3204±0.1987,P=0.0081);MCP-1 的转录水平升高(6.0029±0.6854vs 8.9730±0.4340,P=0.0216)、蛋白表达增加(1.8402±0.0901vs4.0138±0.3347,P=0.0004);TNFα 的转录水平升高(6.3415±0.6792 vs 12.7694±2.1697,P=0.0475)、蛋白表达增加(1.6830±0.0821 vchronobiological changess 3.2697±0.1496,P<0.0001);4)在ox-LDL处理24小时的同时,与对照组相比,ox-LDL+ADPβs共处理组巨噬细胞内总胆固醇含量有增加的趋势(1.2120±0.1977 vs 2.6008 ±0.7391,P=0.1219)、甘油三酯含量增加(0.9820±0.2385 vs 2.3193±0.4525,P=0.0324)、低密度脂蛋白胆固醇含量也有增加的趋势(1.4595±0.1629 vs 2.6963±0.5605,P=0.0797)、脂质吞噬增加(6.5003±0.8272 vs 9.7298±0.8958,P=0.0147);5.P2Y12通过NF-κB/铁调素轴调控巨噬细胞来源泡沫细胞的铁代谢1)在ox-LDL处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞中铁调素的表达量明显降低(0.6520±0.0662 vs 0.2758 ±0.0360,P=0.0121)、FPN1 的表达量明显升高(1.0361±0.1205vs2.2045±0.1846,P=0.0032);2)在ox-LDL处理24小时的同时,与对照组相比,FAC+ADPβs共处理组巨噬细胞内铁调素的表达量明显升高(0.7637±0.0884 vs 1.4691±0.0457,P=0.0040)、FPN1 的表达量明显降低(1.3520±0.0981 vs 1.0000±0.0310,P=0.0191);3)在ox-LDL处理24小时后,与转染对照siRNA组相比,转染P2Y12 siRNA组巨噬细胞中NF-κB磷酸化明显减少(1.0000±0.0558 vs 0.4752±0.0235,P=0.0001)、ox-LDL+ADPβs共处理组巨噬细胞内NF-κB磷酸化明显增加(1.0000±0.0558 vs 1.2089±0.0513,P=0.0347)。四、结论本研究的结果提示:巨噬细胞P2Y12通过NF-κB/铁调素轴调控巨噬细胞铁代谢,对动脉粥样硬化起促进作用。本研究的结论丰富了对巨噬细胞铁代谢、红系造血和动脉粥样硬化之间的相互关系的认识,揭示了 P2Y12抑制剂的潜在作用、为抗血小板治疗策略的个体化提供了参考依据,还提示了 P2Y12可能是铁过载相关疾病的潜在治疗靶点。