小麦miRNA靶基因的体外实验验证

miRNA是一类内源非编码单链小RNA，广泛存在于动植物中，主要通过切割靶基因SCH772984作用或者抑制靶基因表达参与细胞分化、生长和发sandwich type immunosensor育等多种生物学调控。目前缺少一种快速简便验证miRNA靶基因的方法。本研究基于前期筛选到的小麦特有的miRNA——Tae-miR9666a，合成其前体及前体突变体，并连接到表达载体上，构建含此网站有GFP（绿色荧光蛋白）标记的靶基因过表达载体，共转化烟草，通过观察GFP的荧光亮度判断靶基因的切割情况，以此来验证miRNA与靶基因的相互作用。结果发现，共转miRNA前体的烟草叶片的荧光亮度较低，表明靶基因被miRNA切割，其后的GFP无法正常表达；共转miRNA前体突变体的烟草叶片的荧光亮度与单转靶基因的相当，表明miRNA前体突变体未切割靶基因，导致GFP正常表达。本实验有效证明了miRNA的靶基因切割情况，也表明利用烟草验证miRNA与靶基因相互作用是可行的。