硒(Se)是人体必需的微量矿质元素之一,缺硒是造成克山病和大骨节病的主要原因。中国72%的地区为缺硒地区,硒含量分布不匀的事实威胁着人体健康。然而自然界中存在的硒大多为无机态的硒,无机硒毒性较大,不易被人和动物吸收利用;可被人体吸收利用的硒来源是有机硒,有机硒是通过生物转化与氨基酸结合形成。研究表明,食药用菌对无机硒具有较强的富集和转化能力,能够将无机硒转化为有机硒,更有利于机体吸收利用。兰科植物天麻(Gastrodia elata Blume)为草本植物,主要分布于我国陕西、云南、西藏等地区,常生长于疏林下、林缘或灌丛边缘,需与蜜环菌(Armillaria mellea)和萌发菌(Mycena purpureofusca)共生,才能正常生长。天麻是我国名贵的中药材之一,具有镇静催眠、降血压、抗凝血等功效,可有效增强机体的免疫功能。天麻主栽品种以红天麻、乌天麻和绿天麻为主。红天麻也称为红杆天麻,块茎淡黄色、肉质红润、形状美观是中国天麻种植基地陕西省汉中市天麻的主栽品种。本研究以陕西省汉中市天麻人工栽培Colforsin作用生产中常用的蜜环菌、萌发菌为研究对象,采用硒浓度梯度法对天麻共生菌(蜜环菌和萌发菌)进行富硒驯化,得到富硒蜜环菌和富硒萌发菌;对富硒蜜环菌的生物学特征进行初步研究;采用单因素法对富硒萌发菌与天麻种子共生萌发条件进行研究;以富硒萌发菌、蜜环菌与天麻种子进行天麻栽培试验。实验结果如下:1.结合硒浓度梯度法对蜜环菌、萌发菌富硒驯化,结果表明,萌发菌和蜜环菌对无机硒有较好的富集作用且不同菌株对硒的耐受性不同,存在种间差异。随着硒浓度的增加,菌株生长速度呈先上升后下降的规律。综合不同浓度下菌株的生长状况可知,蜜环菌J-234对Na_2Se O_3的耐受浓度为100 mg/L,蜜环菌M-H和蜜环菌A-10对Na_2Se O_3的耐受浓度为60 mg/L,蜜环菌YN-2对Na_2Se O_3的耐受浓度为20 mg/L;萌发菌MDA和萌发菌SHXG对Na_2Se O_3的耐受浓度为10 mg/L,萌发菌MDC对Na_2Se O_3的耐受浓度为30 mg/L,萌发菌MF8C对Na_2Se O_3的耐受浓度为40 mg/L。2.对富selected prebiotic library硒蜜环菌的生物学特征进行初步研究,发现富硒蜜环菌与原种蜜环菌(对照)有显著差异(P<0.05)。富硒蜜环菌生长速度加快,菌索粗壮、分支增多。制备富硒蜜环菌粗酶液进行胞外酶活力及多肽含量研究,结果表明,富硒蜜环菌的胞外酶活力、多肽含量显著高于对照组(p<0.05),其中富硒菌株J-234生物活性最强,其木聚糖酶活力为92 522.46 U/L,淀粉酶酶活力为11 951.49 U/L,纤维素酶活力为8 439.47 U/L,漆酶活力为1.25 U/L,多肽含量为0.087 g/L,说明富硒蜜环菌具有更强的生物活性。3.采用单因素法对富硒萌发菌与天麻种子共生萌发条件进行研究。结果表明,最适条件下富硒萌发菌对天麻种子的共生萌发与对照组相比,天麻种子的萌发率提高。与对照组进行对比分析,在温度为24℃、盐浓度为1 g/L及p H 6.5的条件下,天麻种子的萌发率提高了45.66%CP-456773细胞培养,这为富硒天麻栽培试验奠定了基础。4.天麻栽培试验结果表明,与对照组相比,富硒组天麻硒含量显著增加。对照组中不同萌发菌、蜜环菌组合下天麻种子平均萌发率为24.1%,天麻鲜重平均值为87.588 g,硒含量最高的组合为萌发菌MDC×蜜环菌A-10,其中硒含量为9.614μg/kg;露地栽培组,天麻种子平均萌发率为42.5%,天麻鲜重平均值为92.025 g,硒含量最高的组合为萌发菌F-MF8C×蜜环菌F-J-234,其中硒含量为49.395μg/kg,有机硒含量为49.226μg/kg;栽培棚栽培组,天麻种子平均萌发率46.3%,硒含量最高的组合为萌发菌F-MF8C×蜜环菌F-M-H,天麻鲜重平均值为116.725 g,该组合硒含量为99.328μg/kg,有机硒含量为99.311μg/kg。