目的观察桃红四物汤对大鼠失神经腓肠肌萎缩的作用,并探讨其对氧化应激反应以及AMPK/SIRT1/PGC-1α通路的影响,以期为临床Tezacaftor纯度应用和后续研究提供实验依据。方法采用随机数字法从54只大鼠中随机选18只作为假手术组,其余行坐骨神经切断造模,造模后的大鼠随机分为模型组和桃红四物汤组,每组18只,术后1d分别予以生理盐水、桃红四物汤灌胃。3d、7d和14d时,每组6只检测各组腓肠肌肌湿重比;HE染色观察肌萎缩情况并测定肌纤维横截面积和直径;Elisa试剂盒检测各组腓肠肌中总ROS、总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)检测各组腓肠肌中总抗氧化能力(T-AOC)、总SOD活性检测试剂盒(WST-8法)检测各组腓肠肌中总SOD、总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒检测各组腓肠肌中总谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性;RT-q PCR检测各组腓肠肌AMPKα、SIRT1、PGC-1αm RNA表达;Western Blot检测各组腓肠肌AMPKα、p-AMPKα、SIRT1、PGC-1α蛋白表达。结果1.桃红四物汤对大鼠失神经腓肠肌湿重比的影响大体观可见,模型组、桃红四物汤组术侧腓肠肌较假手术组饱满度明显减低,弹性减弱;桃红四物汤组术侧腓肠肌饱满度及弹性优于模型组。组内不同时间点比较:假手术组各时间点肌湿重比差异无统计学意义。模型组7、14d时模型组肌湿重比低于3d时,14d时低于7d时(P<0.01);桃红四物汤组7、14d时模型组肌湿重比低于3d时,14d时低于7d时(P<0.01)。同时间点组间比较:模型组和transmediastinal esophagectomy桃红四物汤组3、7、14d时肌湿重比均低于假手术组(P<0.01);桃红四物汤组3、7、14d时肌湿重比均高于模型组(P<0.05,P<0.01)。2.桃红四物汤对大鼠失神经腓肠肌肌纤维面积及直径的影响光镜下可见:3、7、14d时,假手术组肌细胞大小正常,排列整齐紧凑,间隙较小;随着失神经支配时间的延长,模型组与桃红四物汤组肌细胞大小不一,形态不规则,排列逐渐紊乱;但桃红四物汤组肌细胞较同时间点模型组形态相对均一。组内不同时间点比较:假手术组各时间点肌纤维横截面积及直径差异无统计学意义。模型组7、14d时肌纤维横截面积及直径低于3d时,14d时低于7d时(P<0.01);桃红四物汤组7、14d时肌纤维横截面积及直径低于3d时,14d时低于7d时(P<0.01)。同时间点组间比较:模型组和桃红四物汤组3、7、14d时肌纤维横截面积及直径低于假手术组(P<0.01);桃红四物汤组3、7、14d时肌纤维横截面积及直径高于模型组(P<0.05,P<0.01)。3.桃红四物汤对大鼠失神经腓肠肌氧化应激反应的影响组内不同时间点比较:假手术组各时间点总ROS含量、T-AOC、总SOD、总GPx活性差异无统计学意义。模型组,7、14d时总ROS含量高于3d时,T-AOC、总SOD、总GPx活性低于3d时,14d时T-AOC、总SOD、总GPx活性低于7d时(P<0.05,P<0.01)。桃红四物汤组,14d时T-AOC及7、14d总SOD、总GPx活性低于3d时,14d时总SOD、总GPx活性低于7d时(P<0.05,P<0.01)。同时间点组间比较:模型组和桃红四物汤组3、7、14d时总ROS含量高于假手术组,T-AOC、总SOD、总GPx活性低于假手术组(P<0.05,P<0.01);桃红四物汤组3、7、14d时总ROS含量低于模型组,T-AOC、总SOD、总GPx活性高于模型组(P<0.05,P<0.01)。4.桃红四物汤对大鼠失神经腓肠肌AMPKα、SIRT1、PGC-1αm RNA的影响组内不同时间点比较:假手术组各时间点AMPKα、SITR1、PGC-1αm RNA的表达量差异无统计学意义。模型组7、14d时AMPKα、SITR1、PGC-1αm RNA的表达量低于3d时,14d时AMPKα、SITR1、PGC-1αm RNA的表达量低于7d时(P<0.05,P<0.01);桃红四物汤组7、14d时AMPKα、SITR1、PGC-1αm RNA的表达量低于3d时,14d时AMPKα、SITR1、PGC-1αm RNA的表达量低于7d时(P<0.05,P<0.01)。同时间点组间比较:模型组和桃红四物汤组3、7、14d时AMPKα、SITR1、PGC-1αm RNA的表达量均低于假手术组(P<0.01);桃红四物汤组3、7、14d时AMPKα、SITR1、PGC-1α各因子的m RNA表达量均高于模型组(P<0.01)。5.桃红四物汤对大鼠失神经腓肠肌p-AMPKα、SIRT1、PGC-1α蛋白的影响组内不同时间点比较:假手术组各时间点p-AMPKα、SITR1、PGC-1α蛋白表达水平差异无统计学意义。模型组7、14d时p-AMPKα、SITR1、PGC-1α蛋白表达水平均低于3d时,14d时p-AMPKα、SITR1、PGC-1α蛋白表达水平均低于7d时(P<0.05,P<0.01);桃红四物汤组7、14d时p-AMPKα、SITR1、PGC-1α蛋白表达水平均低于3d时,14d时p-AMPKα、SITR1、PGC-1α蛋白表达水平均低于7d时(P<0.05,P<0.01)。同时间点组间比较:模型组和桃红四物汤组3、7、14d时p-AMPKα、SITR1、PGC-1α蛋白的表达水平低于假手术组(P<0.01);桃红四物汤组3、7、14d时p-AMPKα、SITR1、PGC-1α的蛋白表达水平高于模型组(P<0.01)。结论1.桃红四物汤可延缓大鼠腓肠肌早期失神经萎缩的程度。2.桃红四物汤延缓腓肠肌早期失神经萎缩与该方可抑制ROS活性AY-22989纯度,激活AMPK/SIRT1/PGC-1α通路,降低氧化应激反应有关。