目的:阐释糖尿康胶囊及其活性成分治疗糖尿病肾病的作用机制,为糖尿康胶囊治疗糖尿病肾病提供数据支持。方法:1.建立糖尿康胶囊的色谱和质谱检测方法,通过自建糖尿康胶囊化合物库、精确分子质量以及二级碎片信息,解析糖尿康胶囊的化学成分。2.在化源网中将糖尿康胶囊的化学成分进行校对,利用Swiss Target Prediction数据库预测成分靶点。应用Gene Cards、TTD、CTD等数据库获取DKD疾病靶点;采用STRING数据库构建PPI网络,通过DAVID数据库进行GO分析和KEGG通路富集分析,运用Cytoscape3.8.2软件进行“有效成分-关键靶点-通路-疾病”网络图展示。最后采用HMC细胞模型,验证网络药理学研究结果。3.采用MTT法观察实验药物对AGE诱导的HMC细胞炎症模型的影响,筛选出糖尿康胶囊及对羟基苯甲酸、松果菊苷、麦角甾苷、红花黄色素A的最佳给药浓度;通过ELISA法观察实验药物对AGE诱导的HMC细胞分泌的IL-6、IL-1β、T获悉更多NF-α表达的影响;Western blot法分别检测RAGE、p65、JUN、TGF-β1蛋白的表达情况,从而考察实验药物对AGE-RAGE/NF-κB/TGF-β1信号通路的调控情况。结果:1.从糖尿康胶囊中共鉴定出58个化学成分,其中包括苯乙醇苷类、黄酮类、有机酸类、生物碱类等。2.糖尿康胶囊治疗糖尿病肾病的有效成分主要为对羟基苯甲酸、松果菊苷、麦角甾苷、红花黄色素A等;核心靶点主要为ALB、TNF、GAPDH、AKT1、VEGFA、IL-1β、TP53、PPARG、EGFR、PTGS2等;涉及的信号通路包括AGE-RAGE、HIF-1、IL-17、TNF、MAPK、NF-κB等。3.(1)与模型组比较,糖尿康胶囊及其有效成分松果菊苷、对羟基苯甲酸、麦角甾苷、红花黄色素A能显著抑制AGE诱导的HMC细胞的增殖,具有统计学意义(P<0.05),且糖尿康胶囊最佳给药浓度为120μg/m L;松果菊苷、对羟基苯甲酸、medical curricula麦角甾苷、红花黄色素A最佳给药浓度为60μg/m L。(2)ELISA实验:经200μg/m L AGE造模成功后,HMC细胞分泌的IL-6、IL-1β、TNF-α表达显著Caspase抑制剂升高,而糖尿康胶囊及四个有效成分可有效降低HMC细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平;其中糖尿康胶囊中含有的红花黄色素A为抑制IL-6水平的主要成分(P<0.0001),松果菊苷为抑制TNF-α水平的主要成分(P<0.0001),而麦角甾苷为降低IL-1β水平的主要成分(P<0.001)。(3)Western Blot实验:与模型组对比,经糖尿康胶囊及四个有效成分干预后,RAGE蛋白水平有明显下调趋势,具有统计学意义(P<0.01,P<0.001,P<0.0001)。糖尿康胶囊中的红花黄色素A有抑制NF-κB蛋白水平的作用,具有统计学意义(P<0.01),而糖尿康胶囊、松果菊苷、麦角甾苷、对羟基苯甲酸对NF-κB蛋白水平调控没有统计学差异。糖尿康胶囊四个有效成分均有抑制JUN蛋白水平的作用,具有统计学意义(P<0.001,P<0.0001)。糖尿康胶囊及有效成分均能下调TGF-β1蛋白水平,具有统计学意义(P<0.001,P<0.0001)。结论:糖尿康胶囊中含有的主要成分包括苯乙醇苷类、黄酮类、有机酸类等。其治疗糖尿病肾病的药效物质为对羟基苯甲酸、松果菊苷、麦角甾苷、红花黄色素A等。糖尿康胶囊及其活性成分可能是通过AGE-RAGE/NF-κB/TGF-β1信号通路调控IL-6、IL-1β、TNF-α等的释放,发挥治疗糖尿病肾病作用。通过本研究,明确了糖尿康胶囊治疗糖尿病肾病的药效物质及作用机制,研究结果将有效推动糖尿康胶囊在糖尿病肾病治疗领域的应用。