目的:焦虑症是一种精神障碍性疾病,是最常见的心理健康问题之一,主要以突如其来和反复出现而又不可言状的恐慌、畏惧、紧张、不安为特点。在临床治疗中,主要以选择性5-羟色胺再摄取抑制剂或苯二氮卓类等西药治疗为主,但存在严重不良反应,因此,研发治疗焦虑更有利的药物非常重要。养神定志颗粒(Yang Shen Ding Zhi granula,YSDZ)是一种中药复方,由熟地黄、远志、茯神、防风、贯众、红参、野菊花、枳壳组成,在临床上对焦虑症患者有具有一定的治疗效果,然而YSDZ中的潜在活性成分及其抗焦虑的潜在作用机制尚不清楚。故本研究以养心安神法作为理论指导,以慢性束缚应激法诱导大鼠焦虑模型,通过网络药理学联合代谢组学方法,发现YSDZ的潜在活性成分、干预靶点以及YSDZ干预后的海马脑区代谢物变化,为指导临床用药及后续的基础研究提供科学依据。方法:1.利用慢性束缚应激法诱导出大鼠焦虑样模型,并且通过旷场、明暗箱和高架十字迷宫实验评价模型制备效果以及YSDZ干预疗效。2.在TCMSP数据库[根据ADME参数(口服利用度(oral bioavailability,OB)≥30%,类药性(drug-likeness,DL)≥0.18作为筛选标准)]获得防风、贯众、红参、熟地黄、野菊花以及枳壳中作用化合物及其预测作用靶点,在BATMAN-TCM数据库(以得分≥20,p值≤0.05作为筛选标准)获得远志以及枳壳中作用化合物及其预测作用靶点。3.在Genecard、OMIM、Drugbank数据库以“Anxiety Disorders”为关键词获取焦虑障碍相关靶点。4.将YSDZ预测靶点与焦虑障碍靶点取交集后,得到治疗潜在靶点,并将潜在靶点导入STRING数据库中进行检索,设定蛋白种类为人类,获取潜在靶点蛋白之间作用关系的数据信息,同时将药物、化合物以及潜在靶点导入Cytoscape软件构建网络图,运用Network Analyzer模块功能计算网络中各节点的拓扑学参数以找出网络中潜在核心化合物以及潜在核心靶点。然后再将靶点导入Metascape数据库,物种选择“homo sapiens”,选择个性化分析,设置P值<0.01,最小计数为3,富集因子>1.5,分别得到GO中的生物过程(biological process,BP)、分子功能(Molecular function,MF)和细胞组成(Cellular componeselleckchem AZD2281nt,CC)和KEGG富集分析结果,并将数据可视化。5.应用海马代谢组学探索YSDZ干预后潜在的代谢物的改变,通过KEGG富集分析探索涉及的代谢通路。结果:1.遭遇慢性束缚应激后,与空白对照组相比,CRS应激下的大鼠在第28天体重显著下降(p<0.001)。同时,YSDZ(4 g/kg)的干预可以减轻CRS引起的体重减轻(p<0.01)。旷场结果显示,与对照组相比,CRS组中心区距离显著减少(p<0.01)。地西泮(p<0.01)和YSDZ(4、8g/kg,p<0.05)可缓解这种情况。与对照组相比,CRS显著缩短了总距离(p<0.001),而地西泮(p<0.001)和YSDZ(2、4g/kg,p<0.01,p<0.001)的干预可以缓解上述现象。同时,地西泮(p<0.05)和YSDZ(4g/kg,p<0.05)也逆转了CRS导致的平均速度下降(p<0.01),明暗箱结果显示,与对照组相比,CRS组在总距离(p<0.01)、光区距离(p<0.01)、光区进入次数(p<0.05)和光区时间(p<0.05)方面显著降低。药物治疗后,这些改变恢复到对照水平。此外,高架十字迷宫结果显示CRS组的OE%(p<0.01)和OT%(p<0.05)低于对照组。YSDZ(4 g/kg)和地西泮改善了OE%(p<0.05,p<0.01)和OT%(p<0.05、p<0.05)的下降。2.通过筛选原则,将YSDZ的潜在靶点与疾病靶点将取交集后,获得治疗46个潜在作用靶点,将潜在作用靶点导入STRING数据库及Cytoscape软件,并且筛选出Degree值排名前5的化合物,分别是胡萝卜素,β-谷甾醇,槲皮素,豆甾醇以及山奈酚;排名前5的靶点分别是PTGS1,GABRA1,TNF,ESR1以及IL1β。3.将潜在治疗靶点导入Metascape数据库后,分别得到BP、MF、CC以及KEGG富集分析结果。KEGG富集分析结果主要涉及多巴胺能突触,5-羟色胺能突触,神经活性配体-受体相互作用等。4.海马代谢组学结果显,与对照组相比,遭遇CRS后,49种代谢物水平发生了显著改变,其中42种代谢物如5-Hydroxyindoleacetic acid,Aminoparathion,Diplodiatoxin等被CRS下调,7种代谢物水平如3betEmpagliflozin生产商a,7alpha-Dihydroxy-5-cholestenoate,Sphinganine等遭受CRS后水平上升,其中Pyrimidine,Thiamine,5-(2-Hydroxyethyl)-4-methylthiazole,3-Formyl-6-hydroxyindole,Acetone cyanohydrin,1-Methyladenine,Benzaldehyde,5-Aminopentanal,Dimethylglycine,2-(Methylamino)benzoic acid,Aminoadipic acid以及Toluene等代谢物被CRS下调,而给予YSDZ则上调了上述代谢物水平。KEGG富集分析发现YSDZ发挥抗焦虑作用与硫胺素、半胱氨酸和蛋氨酸代谢及赖氨酸的生物合成和降解等有关。结论:1.CRS建立了成功且可靠的焦虑症模型,而YSDZ具有抗焦虑作用。2.预测YSDZ中的潜BC Hepatitis Testers Cohort在活性成胡萝卜素,β-谷甾醇,槲皮素,豆甾醇及山奈酚等成分通过多巴胺能突触,5-羟色胺能突触,神经活性配体-受体相互作用等途径作用于PTGS1,GABRA1,TNF,ESR1以及IL1B等潜在靶点上。3.YSDZ主要通过调节硫胺素、半胱氨酸和蛋氨酸代谢及赖氨酸的生物合成和降解等代谢途径发挥抗焦虑作用。