目的烟碱是卷烟烟气中的重点关注成分,吸入后主要作用于中枢神经系统,目前对于烟碱的体外毒性评价研究多为单一或少量指标的评价。因此selleck PS-341,本研究拟基于人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y系统性评价烟碱的体外毒性风险,具体涉及细胞毒性、遗传毒性、氧化应激、线粒体损伤、细胞凋亡等,并探讨其毒性来源的可能机制。材料和方法 (1)0,1,10,100,1000,2000,3000,5000,10000μmol·L~(-1)烟碱处理人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞24 h,显微镜下观察细胞,CCK8法检测细胞存活率。(2)根据细胞存活率曲线,使用0,1,10,100,1000,2000μmol·L~(-1)烟碱处理SH-SY5Y细胞24 h,采用EdU掺入法检测细胞增殖,LDH释放法检测细胞膜损伤,JC-1探针购买Nirogacestat检测线粒体膜电位变化,Wegenetic discriminationstern Blot检测凋亡标志物Cleaved Caspase3水平,Dihydroethidium荧光探针检测活性氧水平,免疫荧光检测DNA双链断裂标志物γH2AX水平,PI染色法检测细胞周期,吖啶橙(AO)和LysoTracker Deep Red探针检测细胞内酸性细胞器变化。(3)平板克隆法检测0,1,10,100,1000,2000μmol·L~(-1)烟碱处理SH-SY5Y细胞7天后的克隆形成率。结果(1)2000～10000μmol·L~(-1)烟碱处理24 h剂量依赖性地诱导SH-SY5Y细胞存活率下降,烟碱对SH-SY5Y细胞的半抑制浓度(IC50)为6066±439μmol·L~(-1)。(2)1000、2000μmol·L~(-1)烟碱诱导SH-SY5Y细胞内酸性细胞器体积、γH2AX水平显著增加(P<0.05),细胞克隆形成率显著下降(P<0.05)。(3)在检测剂量范围内,烟碱未显著诱导细胞膜损伤以及细胞周期、Cleaved Caspase3水平、活性氧水平、线粒体膜电位的变化(P>0.05)。(4)2000μmol·L~(-1)烟碱诱导SH-SY5Y细胞出现空泡化现象,细胞内空泡与酸性细胞器共定位,液泡型H+-ATPase抑制剂Bafilomycin A1可逆转细胞空泡化现象,表明空泡来源于酸性细胞器。结论烟碱在较高剂量下对神经细胞产生细胞毒性,在检测的细胞毒性剂量范围内未诱导氧化应激、细胞膜损伤、线粒体损伤和细胞凋亡,但引起DNA损伤和酸性细胞器膨胀。然而,在长期暴露(7天)下,100μmol·L~(-1)烟碱并未导致显著的细胞毒性,表明在生理相关浓度(1μmol·L~(-1))下,烟碱产生的毒性作用有限。此外,烟碱诱导的酸性细胞器膨胀可能是其产生细胞毒性和遗传毒性的潜在机制。