目的:四神丸出自《证治准绳》,是治疗脾肾阳虚型泄泻的经典名方,在现代医学中常用于治疗溃疡性结肠炎、肠易激综合征等消化道疾病。抑郁症患者常伴发胃肠功能紊乱的躯体症状,且抑郁与消化道疾病存在共患关系,基于此,本研究拟通过抑郁动物模型对四神丸的抗抑郁作用进行评价,并探究其作用的机制。方法:1.四神丸抗抑郁效应评价:1)采用行为绝望模型评价四神丸(1.25,2.5和5 g·kg~(-1))对小鼠强迫游泳不动时间和悬尾不动时间的影响;2)通过腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠抑郁模型,采用悬尾实验(Tail Suspe nsion Test,TST)以及糖水偏爱实验(Sucrose Preference Test,SPT)评价四神丸对LPS诱导的抑郁行为的影响;3)建立嗅球切除模型(Olfactory Bulbectomy,OB),采用旷场实验(Open Field Test,OFT)、毛发评估实验(Coat State Test,CST)以及TST评价四神丸对OB小鼠抑郁行为的影响。2.四神丸抗抑郁作用机制研究:1)药物相互作用模型:采用5-羟色氨酸(5-hydroxytryptophane,5-HTP)诱导的小鼠甩头实验以及育亨宾毒性增强实验初步评价四神丸对小鼠脑内单胺系统的影响。2)LPS模型:采用高效液相色谱-电化学检测技术(High Performance Liquid Chromatography-Electrochemical Detect ion,HPLC-ECD)检测四神丸对小鼠海马单胺递质及其代谢物含量的影响。3)OB模型:采用HPLC-ECD技术检测四神丸对OB小鼠前额皮层单胺递质及代谢物含量的影响;通过酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测OB模型血清超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-Px)和丙二醛(Malonaldehyde,MDA)的含量;采用免疫印迹法(Western Blot,WB)检测四神丸对小鼠海马中5-HT_(1A)受体(5-HT_(1A) Receptor,5-HT_(1A))、磷酸化c AMP反应元件结合蛋白(Phosphorylated c AMP Responseelement-Binding Protein,p CREB)、脑源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor,BDNF)、酪氨酸激酶B(tyrosineKinase Receptor B,Trk B)、离子钙结合适配器分子1(Ionized Calcium Binding A dapter Molecule 1,Iba-1)、胶质纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,G FAP)以及下丘脑中芳基烃受体核转运体样蛋白(Aryl Hydrocarbon cultural and biological practicesReceptor Nuc lear Translocator-Like Protein 1,BMAL1)、昼夜节律蛋白2(Period Circadian Clo ck 2,PEZ-VAD-FMK研究购买R_2)、Clock同源物(Clock Homolog,CLOCK)蛋白表达水平的影响。结果:1.四神丸抗抑郁效应评价:1)在行为绝望模型中,四神丸(1.25和5 g·kg~(-1))连续给药可显著缩短小鼠强迫游泳不动时间和悬尾不动时间,OFT结果表明四神丸不影响小鼠的自发活动性;2)在LPS模型中,四神丸(5 g·kg~(-1))显著逆转了LPS诱导的悬尾不动时间延长和糖水偏嗜度降低的抑郁GSK1349572价格样行为;3)在OB模型中,四神丸(5 g·kg~(-1))慢性治疗可显著降低OB模型小鼠的活动性和悬尾不动时间,并显著升高小鼠毛发评分。2.四神丸抗抑郁作用机制研究:1)药物相互作用模型:四神丸可显著增加5-HTP诱导的小鼠甩头次数,但对育亨宾所致的毒性反应无显著影响。2)LPS模型:四神丸显著增加了模型小鼠海马中5-HT的含量,并降低了5-HIAA/5-HT的比值;3)OB模型:四神丸可显著降低模型小鼠血清中MDA水平,显著升高SOD和GSH-Px水平;WB结果表明,四神丸可显著上调OB小鼠海马中5-HT_(1A)、p CREB、BDNF和Trk B的表达水平,并降低OB小鼠海马Iba-1和GFAP的表达;四神丸显著增加了OB小鼠下丘脑正向调节因子BMAL1和CLOCK的表达水平,并显著下调负向调节因子PER_2的表达。结论:四神丸在行为绝望模型、LPS诱导的抑郁模型以及OB模型中均具有抗抑郁作用。其抗抑郁作用可能与抑制炎症反应,增强脑内单胺神经系统功能以及神经可塑性有关,改善节律中枢的转录—翻译反馈环的紊乱并调节体内氧化应激水平可能也是四神丸发挥抗抑郁作用的机制之一。图[20]表[1]参[75]