目的多种炎症因子变化在SIRS发生、发展中占据核心地位,而刮痧疗法对炎症因子具有调节作用。本研究从时间维度动态分析炎症过程,探究不同时机介入不同频次的刮痧疗法对SIRS大鼠生存率及相关炎症因子的影响。方法实验一将禁食12h后体重200±10g的SPF级健康成年Wistar大鼠,按照随机数字表法分成空白组、400mg/kg ZY组、500mg/kg ZY组、600mg/kg ZY组、700mg/kg ZY组,每组16只,共80只。空白组予以大鼠腹腔注射灭菌石蜡油,400mg/kg ZY组、500mg/kg ZY组、600mg/kg ZY组、700mg/kg ZY组分别予以大鼠400mg/kg、500mg/kg、600mg/kg、700mg/kg剂量的醇母多糖石蜡混悬液进行腹腔注射,每组随机选取6只于造模前和造模后6、24h测量直肠温度,以及在造模后24h采用全自动血液分析仪检测外周血白细胞计数,并取材对肺、肝、脾、肾进行组织HE病理学检测,不纳入生存率观察。每组剩余10只分别于造模后6、24、48、72、96h进行生存率观察记录。实验二将禁食12h后体重200±10g的SPF级健康成年Wistar大鼠,按照随机数字表法分成模型组和刮痧组,每组54只,共108只。(1)模型组再随机分为9个组:PreZY、ZY-1h、ZY-2h、ZY-4h、ZY-6h、ZY-8h、ZY-12h、ZY-16h、ZY-24h组,每组6只,共54只;所有模型组大鼠造模方式参照实验一(Pre-ZY组不进行腹腔注射酵母多糖混悬液),不介入其他任何干预措施。每组大鼠分别于对应组别时间点(造模前、造模后1h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、24h)进行眼眶静脉丛采血采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TNF-α、IL-6含量。(2)刮痧组再随机分为9个组:Pre-GS、GS-1h、GS-2h、GS-4h、GS-6h、GS-8h、GS-12h、GS-16h、GS-24h组,每组6只,共54只;刮痧组对象为健康大鼠,均不进行酵母多糖混悬液腹腔注射,仅进行刮痧干预(Pre-GS组不进行刮痧)。每组大鼠分别于对应组别时间点(刮痧前、刮痧后1h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、24h)进行眼眶静脉丛采血采用ELISA检测血清IL-6含量。通过关键炎症因子24h内趋势描绘炎症及刮痧变化规律,得到“炎症加剧点”“炎症峰值点”“刮痧效应峰值点”,并拟定刮痧介入的“特征时机”。实验三将禁食12h后体重200±10g的SPF级健康成年Wistar大鼠,按照随机数字表法分成空白组、模型组、刮痧1次组、刮痧2次组、刮痧3次组,每组16只,共80只,所有组别造模方式参照实验一。空白组、模型组仅模拟抓取,刮痧1次组、刮痧2次组、刮痧3次组参照实验二结果,均于“特征时机”开始介入刮痧,刮痧2次组于第一次刮痧后间隔1小时进行第二次刮痧;刮痧3次组于第一次刮痧后间隔1小时进行第二次刮痧后,再间隔1小时进行第三次刮痧。每组随机选取6只于“炎症加剧点”,眼眶静脉丛采血分离血清ELISA检测关键炎症因子TNF-α、IL-6含量;于“炎症峰值点”取材检测血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10及脏器相关炎症因子IL-6含量,并对各脏器进行组织HE病理学分析,不纳入生存率观察。每组剩余10只分别于造模后6、24、48、72、96h进行生存率观察记录。实验四将禁食12h后体重200±10g的SPF级健康成年Wistar大鼠,按照随机数字表法分成空白组、模型组、即刻刮痧组,每组16只,共48只。各组造模方式参照实验一,即刻刮痧组刮痧次数参照实验四结果。根据实验二结果,每组随机选取6只于“炎症峰值点”,采集腹主动脉血液,分离血清ELISA检测相关炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10含量,不纳入生存率观察。每组剩余10只分别于造模后6、24、48、72、96h进行生存率观察记录。结果1、实验一各组生存率情况:与空白组、400mg/kg ZY组和500mg/kg ZY组相比,600mg/kg ZY组和700mg/kg ZY组生存率均表现为显著降低(P<0.01),但600mg/kg ZY组与700mg/kg ZY组两组间生存率无显著差异(P>0.05)。2、直肠温度测定结果:造模后6h,600mg/kg ZY组和700mg/kg ZY组的直肠温度与400mg/kg ZY组相比显著降低(P<0.01),且与对照组相比也显著降低(P<0.05)。造模后24h,与空白组比,400mg/kg ZY组的直肠温度显著升高(Pselleckchem NSC 127716<0.01);与400mg/kg ZY组比,500mg/kg ZY组、600mg/kg ZY组和700mg/kg ZY组直肠温度均显著降低(P<0.05)。3、外周血白细胞计数结果:造模后24h,与空白组相比,500mg/kg ZY组、600mg/kg ZY组和700mg/kg ZY组外周血白细胞计数均显著降低(P<0.05、P<0.01)。4、肺、肝、脾、肾组织病理学观察结果:造模后24h大鼠肺组织结构混乱,肺泡壁增厚,肺间质充血、水肿,肺间质炎性细胞浸润;肝细胞肿胀、变性,排列紊乱,中央静脉、肝窦、门静脉区血管壁充血,肝组织周围布满炎性细胞;脾组织结构不清,红髓与白髓界限不明,巨噬细胞等分布密集;可见明显的肾小球萎缩、炎性细胞浸润和部分肾小管间质水肿。而随着酵母多糖剂量增加,大鼠肺、肝、脾、肾组织损伤程度逐渐加重,且以600mg/kg ZY组和700mg/kg ZY组损伤最为明显。5、实验二大鼠造模24h内,血清TNF-α含量于造模后2h最高,且与造模前及造模后1h、4h、6h、24h相比显著上升(P<0.01);血清IL-6含量于造模后12h最高,与造模前及造模后1h、2h、4h、6h、8h、16h、24h相比显著上升(P<0.01)。另外大鼠刮痧24h内,血清IL-6含量于刮痧后8h最高,与刮痧前及刮痧后1h、2h、4h、6h、8h、16h、24h相比显著上升(P<0.01)。提示造模前6h介入刮痧可使得“刮痧效应峰值点”落在“炎症加剧点”。6、实验三各组生存率情况:与空白组相比,刮痧1次组、刮痧2次组和模型组生存率均表现为显著降低(P<0.01);与模型组比,刮痧3次组显著提高生存率(P<0.01)。7、血清炎症因子检测结果:(1)“炎症加剧点”时,与模型组比较,刮痧2次组和刮痧3次组血清TNF-α水平明显降低(P<0.05);刮痧3次组血清IL-6水平较模型组和刮痧1次组均明显降低(P<0.05)。(2)“炎症峰值点”时,与模型组相比,刮痧1次组、刮痧2次组、刮痧3次组均能显著降低大鼠血清IL-6表达(P<0.01);刮痧3次组较模型组相比显著降低大鼠血清IL-1β的表达(P<0.05),显著提高大鼠血清抗炎因子IL-10的表达(P<0.01)。与刮痧1次组相比,刮痧3次组能显著降低大鼠血清IL-6、IL-1β表达(P<0.01),和提高血清抗炎因子IL-10的表达(P<0.01)。与刮痧2次组相比,刮痧3次组能显著降低大鼠血清IL-6表达(P<0.05),和提高大鼠血清抗炎因子IL-10的表达(P<0.01)。8、免疫组化结果:“炎症峰值点”时,Elexacaftor(1)大鼠肺组织,与模型组相比,刮痧1次组、刮痧2次组、刮痧3次组IL-6蛋白阳性平均光密度均显著降低(P<0.01);与刮痧1次组相比,刮痧2次组、刮痧3次组IL-6蛋白阳性平均光密度均显著减少(P<0.01);而刮痧3次组较刮痧2次组IL-6蛋白阳性平均光密度显著减少(P<0.01)。(2)大鼠肝组织,与模型组相比,刮痧2次组、刮痧3次组IL-6蛋白阳性平均光密度均显著降低(P<0.01);而刮痧3次组较刮痧1次组IL-6蛋白阳性平均光密度显著减少(P<0.01)。(3)大鼠脾组织,与模型组相比,刮痧1次组、刮痧2次组、刮痧3次组IL-6蛋白阳性平均光密度均显著降低(P<0.01);另外,刮痧3次组较刮痧1次组和刮痧2次组IL-6蛋白阳性平均光密度显著降Plant biomass低(P<0.01)。(4)大鼠肾组织,与模型组相比,仅刮痧3次组IL-6蛋白阳性平均光密度显著降低(P<0.01);此外,刮痧3次组较刮痧1次组IL-6蛋白阳性平均光密度显著减少(P<0.05)9、肺、肝、脾、肾组织病理学观察结果:“炎症峰值点”时,模型组大鼠肺、肝、脾、肾组织表现同实验一。各刮痧组随着刮痧次数的增加,大鼠肺、肝、脾、肾组织较模型组炎症损伤程度逐渐减轻,以刮痧3次组改善最为明显。10、实验四各组生存率情况:与空白组相比,模型组和即刻刮痧组生存率均表现为显著降低(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,即刻刮痧组生存率有上升趋势,但无统计学差异(P>0.05)。11、血清炎症因子检测结果:与模型组相比,即刻刮痧组血清IL-1β表达显著降低(P<0.01)。而即刻刮痧组大鼠血清促炎因子TNF-α、IL-6较模型组有下降趋势,血清抑炎因子IL-10较模型组有上升趋势,但统计学均无差异(P>0.05)。结论1、腹腔注射酵母多糖混悬液可诱导大鼠SIRS模型,且具有明显的剂量依赖性。2、造模前6h介入刮痧可使“刮痧效应峰值点”落在“炎症加剧点”,且此时介入3次刮痧比1次或2次刮痧更能显著提高SIRS模型大鼠生存率,降低血清促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β和提高血清抗炎因子IL-10的表达,及更能减轻各脏器组织炎症损伤。3、造模即刻介入3次刮痧已不能显著提高SIRS模型大鼠生存率,亦不能显著降低血清促炎因子IL-6、TNF-α和提高血清抗炎因子IL-10的表达。4、不同时机介入刮痧疗法对SIRS模型大鼠产生效应不同,造模前介入一定频次的刮痧疗法比造模即刻介入刮痧疗法,具有相对更优效的干预效应。