两头尖是毛茛科植物多被银莲花(Anemone raddeana Regel)的干燥根茎,广泛分布于我国东北、河北和山东等地,主要用于风湿类疾病的治疗。现代研究表明两头尖还具有抗肿瘤、抗炎和镇痛等药理作用,富含皂苷、多糖和黄酮类等化合物。免疫应激是指动物受到外界一定刺激,或遭受病原侵袭,导致机体免疫低下,同时伴有大量炎性细胞因子分泌的过程。发生免疫应激后,机体肾上腺激素与糖皮质激素的合成效率增加,但机体对脂肪与蛋白的代谢能力却大幅降低。在集约化养殖模式下,畜禽免疫应激较为严重,不仅影响了健康水平、生产性能和产品质量等,还减少了经济效益。随着健康养殖理念的不断深入,中兽药的免疫调节作用日益受到重视。本试验以两头尖总皂苷为研究对象,从提取工艺、化学成分和对免疫应激的影响等方面进行考察,为研发预防及治疗免疫应激中兽药提供重要参考。本研究通过单因素试验及响应面优化法考察两头尖总皂苷的最优提取工艺;采用超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)技术初步分析两头尖总皂苷的主要化学成分;采用脂多糖(LPS)构建免疫应激小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)和小鼠模型,采用Griess法检测细胞上清液及小鼠血清中信使分子NO含量;采用中性红试验检测细胞吞噬活性;观察HE染色法制得的病理切片,探究免疫器官组织病理变化;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液和小鼠血清中免疫相关细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度;采用免疫印迹法(Western Blot)检测TLR4-My D88-NF-κB信号通路中TLR4、My D88、p-p65和p65蛋白相对表达量,揭示两头尖总皂苷对免疫应激的影响。本研究确定了两头尖总皂苷最优超声提取工艺为:乙醇浓度:50%,液料比:43(m L/g),提取时间:70 min,在上述参数下进行提取,获得两头尖总皂苷提取率为1.74%;初步分析了两头Enfermedad cardiovascular尖总皂苷中43种JNJ-42756493说明书化合物,包括34种皂苷、6种有机酸、2种黄酮和1种不饱和脂肪酰胺;体内试验结果表明,两头尖总皂苷能够减少体内信使分子NO含量、降低体内IL-6、IL-10和TNF-α浓度;体外试验结果表明,两头尖总皂苷能够减少体外信使分子NO含量、抑制细胞吞噬活性、降低体外IL-6、IL-10和TNF-α浓度、下调TLR4-My D88-NF-selleck AlisertibκB信号通路中TLR4、My D88、p-p65和p65蛋白相对表达量,揭示两头尖总皂苷能够通过调控TLR4-My D88-NF-κB信号通路缓解免疫应激状态。本试验优化得到两头尖总皂苷的最优超声提取工艺,初步分析了其化学成分,明确了两头尖总皂苷对免疫应激的调控作用,并进一步揭示其可能通过调控TLR4-My D88-NF-κB信号通路影响免疫应激进程,上述研究结果为抗免疫应激中兽药的研发提供了重要的参考依据。