稳定表达ABCG2细胞模型的建立及其在筛选ABCG2抑制剂中的应用

本研究构建了一种稳定表达ATP结合盒转运蛋白2 (ATP binding cassette subfamily G member 2, ABCG2)并可用于筛选ABCG2抑制剂的细胞模型。首先,利用脂质体lipo3000将表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2转染至HEK293细胞,经G418Dibutyryl-cAMP临床试验筛选阳性克隆株后,采用q RT-PCR与Western-blot方法进行ABCCRG 81045生产商CG2稳转细胞株(稳转株)pediatric infection的鉴定;随后,利用差速离心法提取膜囊泡,通过14C-尿酸同位素摄取实验筛选ABCG2抑制剂。结果表明, ABCG2稳转株的mRNA及蛋白质表达水平分别为野生型的1 717.5倍和2.64倍;经其提取的囊泡摄取14C-尿酸的能力为对照囊泡的3.73倍。利用上述工具细胞,研究评价了临床常用的降尿酸药物对ABCG2的抑制活性。结果显示,苯溴马隆抑制ABCG2的IC50值为(3.45±1.09)μmol/L, RDEA3170抑制ABCG2的IC50为(9.90±2.11)μmol/L。综上所述,本实验成功构建了ABCG2抑制剂体外筛选模型,并首次发现RDEA3170具有ABCG2抑制作用。